胶体金法：免疫电镜技术理想的免疫标记物，具有巨大发展潜力

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胶体金法是氯金酸（）在白磷、抗坏血酸、柠檬酸钠、单宁酸等还原剂作用下，能聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用，成为稳定的胶体状态，形成带负电荷的疏水胶体溶液。由于静电作用，成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金也是免疫电镜技术中比较理想的免疫标记物。胶体金技术具有操作方便、特异性灵敏、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点，因此特别适用于基层检验人员、大规模检测和大规模普查等，具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。层析免疫胶体金检测试剂是免疫金标记技术与抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式。中国香港免疫层析仪市场价格

胶体金的制备1、胶体金制备注意事项 (1)玻璃容器的清洗：玻璃容器应保持洁净，使用前应进行酸洗和硅化处理。 (2)试剂及水质：实验用水一般采用双蒸水，缓冲溶液有足够大的缓冲容量，浓度不宜过高，以防金溶胶自凝。 2、常用方法 一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、单宁酸、白磷等。 (1)柠檬酸三钠还原法：取0.01%氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾。搅拌下，准确加入1%柠檬酸三钠水溶液0.7ml，金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色。继续煮沸15分钟，冷却后，用蒸馏水恢复至原体积。这样制备的金溶胶在可见光区的最大吸收峰在535nm处，A1cm/535nm=1.12。2）柠檬酸三钠-单宁酸混合还原剂：改变单宁酸的加入量，可得到不同大小的胶体颗粒。（3）白磷还原法：制备的胶体金粒径在6nm左右，均匀性好，但白磷和伊米均易燃易爆，不适用于一般实验室。浙江胶体金检测读数仪参考价格自动准确识别CT线位置。

胶体金在电镜水平上的应用：胶体金在电镜水平上的应用研究较早，发展较快，应用较多。它的优点是可以利用不同大小的颗粒或结合酶标记物进行双重或多重标记。直径为3～15nm的胶体金可以作为电镜水平的标记物。直径为3～15nm的胶体金多用于检测单个抗原颗粒，直径为15nm的胶体金多用于检测大量染色的细胞。胶体金在电镜水平上的研究，主要包括：细胞悬浮液或单层培养中细胞表面抗原的观察。单层培养中细胞内抗原的检测。组织抗原的检测。胶体金在光镜水平上的应用：胶体金还可以作为光镜水平的标记物，取代传统的荧光素、酶等。各类细胞涂片、切片均可使用。主要用于：用单克隆抗体或抗血清检测细胞悬浮液或培养单层细胞的膜表面抗原。检测培养单层细胞的胞内抗原，以及检测组织或亚薄切片中的抗原。

胶体金的质量鉴定：1、胶体金粒径测定：用预先处理好的覆有薄膜的镍网浸入胶体金溶液中，取出后晾干或37℃烘箱烘烤。然后在透射电子显微镜下观察，主要观察金粒的大小，是否符合要求的粒径，金粒是否均匀，有无椭圆形、多角形金粒。理想的金粒大小基本相等，均匀一致，无椭圆形、多角形金粒。拍片放大后也可测量金粒直径的大小。2、胶体金颗粒均匀度测定：一般需测量100个以上的胶体金颗粒，然后通过统计处理，计算胶体金颗粒的平均直径和标准差。前者反映颗粒的大小，后者表示颗粒是否均匀。 3、影响胶体金颗粒大小的因素：若大小不一的金颗粒较多，椭圆形、三角形金颗粒较多，应重新制备。一般造成这种情况的主要原因是加还原剂时，不是一次快速加入，而是多次加入，另外搅拌不均匀，搅拌速度过慢，导致颗粒大小不均匀。制备量、容器大小、加热时间等也会影响胶体金颗粒大小。制备合格的胶体金后，应在室温或4℃保存。切忌低温冷冻，因为冷冻会使胶体金凝集，破坏胶体状态。胶体金常温下放置于黑暗无尘环境中可保存约3个月。冰箱中可保存约半年。胶体金读数仪支持机内孵育。

胶体金免疫层析（GICA）技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立起来的一种简便、快速的免疫学检测技术。胶体金免疫层析（GICA）作为一种可靠的免疫学检测技术，特异性强、灵敏度高、简便快速，不需要特殊的仪器设备，在动物检验检疫实际工作中有很强的应用价值。目前，国内已生产少量兽用商品化GICA试纸（如克伦特罗试纸、鸡法氏囊病试纸、猪旋毛虫病和新城疫试纸等）。如加大研发力度，GICA技术有望用于多种疾病的快速诊断检测，对我国动物检验检疫的科学化、规范化、快速化具有重要意义。内置大容量存储器，检测结果自动存储在仪器内部存储器中。云南胶体金阅读器参考价格

该检测操作简单，一般只需1-3步即可完成快速定量检测。

胶体金溶液是指分散相粒径在1～150nm之间的金溶胶，属于多相非均质体系，颜色从橙色到紫色不等。1971年胶体金首次作为免疫组化标记物使用，Faulk等人利用电子显微镜免疫胶体金染色（IGS）观察沙门氏菌，之后将胶体金与多种蛋白质结合，1974年将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上，建立了间接免疫胶体金染色法。1978年，人们发现了胶体金标记物在光学显微镜水平上的应用，胶体金在免疫化学中的这种应用又称为免疫金。之后，许多学者进一步证实胶体金能稳定、快速地吸附蛋白质，且蛋白质的生物活性不发生明显改变。它可作为探针，在细胞表面和细胞内对多糖、蛋白质、多肽、抗原、核酸等生物大分子进行精确定位，也可用于日常免疫诊断、免疫组化定位，因此在临床诊断、药物检测中的应用受到重视。目前，电子显微镜水平的免疫金染色（IGS）、光镜水平的免疫金银染色（IGSS）以及肉眼水平的斑点免疫金染色越来越成为科研和临床诊断的有力工具。

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